Co je to polyakrylamidové gel?

Polyakrylamidový gel je roztok běžně používaný v elektroforéze, proces oddělování molekul nebo částic různých velikostí jejich průchodem gelem a použitím elektrického proudu.Existují různé recepty na polyakrylamidový gel, ale obvykle obsahuje akrylamid, vodu, pufr, persulfát amonia (APS) a tetramethyletylemendiamin (Temed).Tento gel funguje jako matice, která odděluje sloučeniny na základě jejich náboje a velikosti;Čím více akrylamidu v gelovém roztoku, tím lepší separace menších molekul.Tento gel se obvykle používá pro separaci proteinu a DNA.

V elektroforéze způsobuje elektrické pole nabité částice pohybující se gelem, který funguje jako síto, což způsobuje, že se částice různých velikostí oddělí.Gel absorbuje jakékoli teplo vyrobené z elektrického proudu.V tomto postupu se běžně používá polyakrylamidový gel, ale lze také použít agarózu, další chemikálii, která vytváří podobný gel.Při míchání gelu je akrylamid nepolymerizován, což znamená, že zůstává jako jednotlivé molekuly.Přidání dalších chemikálií, které podporují vazbu, jako je Temed, způsobuje, že molekuly spojují společně vytvářející dlouhé řetězy mdash;poly polyakrylamid.

Hlavní výhodou polyakrylamidového gelu je to, že počet vazeb a tvrdosti může být řízen na základě počátečního množství akrylamidu a přidáno Temed.Hlavním faktorem koncentrace akrylamidu je velikost analyzované molekuly.Čím menší jsou sloučeniny oddělené, tím více akrylamidu je zapotřebí;Velmi malé částice jsou odděleny pomocí nejvyšší koncentrace, 15 procent.

Acrylamid funguje kontrolou množství tření v gelu;Tvrdost gelu určuje množství tření.Sloučeniny, které jsou velké, se pohybují gelem pomaleji, protože kvůli jejich velikosti je přirozeně větší tření nebo odpor.Menší sloučeniny se pohybují rychleji, protože je menší tření.Aby se zabránilo malému sloučeninám v přesunu gelu, přidá se více akrylamidu, aby se vytvořilo větší tření.

DNA polyakrylamidový gel se používá k oddělení řetězců DNA s různou délkou.Kousky DNA se budou oddělit jen o jeden nukleotid, sloučeniny, které tvoří každý pramen.Abychom věděli, které kusy odkazují na specifické velikosti, standard, který obsahuje fragmenty známé velikosti, se běžně provádí spolu se vzorky.Kousky DNA jsou pak porovnány se standardem a je stanovena velikost řetězce.

Podobný postup se používá ke stanovení velikosti proteinů, nejčastěji v krvi.Krev obsahuje dva hlavní typy proteinu: globulin, protein velké velikosti a sérový albumin, velmi malý, negativně nabitý protein.Separace pomocí polyakrylamidového gelu se používá ke stanovení množství každého typu.