Co je to srážení proteinů?

Srážení proteinu je metoda používaná k extrakci a čištění proteinů držených v roztoku.Velké, komplexní molekuly, proteiny mají obecně části, které mají negativní elektrický náboj a části, které mají kladný náboj, jakož i hydrofilní a hydrofobní části.Existuje tendence pro proteiny v roztoku ke shluku společně a vysrážení kvůli přitažlivosti mezi negativně a pozitivně nabitými částmi molekul a vzájemnou přitažlivostí hydrofobních částí.Útokem k této tendenci je však skutečnost, že ve vodném roztoku se molekuly vody, které jsou polární, budou mít tendenci se uspořádat kolem proteinových molekul v důsledku elektrostatické přitažlivosti mezi opačně nabitými částmi vody a proteinových molekul.To má za následek, že proteinové molekuly jsou odděleny a zbývají v roztoku, ale existují různé metody pro dosažení srážení proteinů.solení.Nejčastěji používanou sůl je síran amonného.Interakce solných iontů molekulami vody odstraňuje vodní bariéru mezi proteinovými molekulami, což umožňuje, aby se hydrofobní části proteinu dostaly do kontaktu.To má za následek, že se proteinové molekuly agregují společně a vyrábějí z roztoku.Obecně platí, že čím vyšší je molekulová hmotnost proteinu, tím nižší je koncentrace soli, která je nutná k tomu, aby způsobila srážení, takže je možné oddělit směs různých proteinů v roztoku postupným zvyšováním koncentrace soli, takže tak, že tak, aby koncentrace soli, tak, aby se tak mělo, takže je tak, aby se tak mělo zvyšovat koncentrace soli takRůzné proteiny se sráží v různých stádiích, což je proces známý jako frakční srážení.

Rozpustnost proteinu ve vodném médiu může být snížena zavedením organického rozpouštědla.To má za následek snížení dielektrické konstanty, která v tomto kontextu lze považovat za míru polarity rozpouštědla.Snížení polarity znamená, že existuje menší tendence, aby se molekuly rozpouštědly seskupily kolem proteinu, takže existuje méně vodní bariéry mezi molekulami proteinů a větší tendencí k srážení proteinů.Mnoho organických rozpouštědel interaguje s hydrofobními částmi molekul proteinů, což způsobuje denaturizaci;Některé, jako je ethanol a dimethylsulfoxid (DMSO), však ne.

Ačkoli proteiny mohou mít negativně a pozitivně nabité části, často v roztoku budou mít celkový kladný nebo negativní náboj, který se liší podle pH,a udržuje je odděleně elektrostatickým odpuzováním.V kyselých podmínkách, s nízkým pH, mají proteiny tendenci mít celkový kladný náboj, zatímco při vysokém pH je náboj negativní.Proteiny mají přechodný bod, ve kterém neexistuje celkový náboj mdash;Toto je známé jako isoelektrický bod a pro většinu proteinů leží v rozmezí pH 4-6.Isoelektrický bod pro rozpuštěný protein lze dosáhnout přidáním kyseliny, obvykle chloroklorické nebo kyseliny sírové, aby se snížilo pH na vhodnou úroveň, což umožnilo shlukování a srážení molekul proteinů.Nevýhodou této metody je, že kyseliny mají tendenci denaturovat protein, ale často se používá k odstranění nežádoucích proteinů.První z nich snižuje množství vody dostupné pro vytvoření bariéry mezi molekulami proteinů, což jim umožňuje shlukovat a srážet.Pozitivně nabité kovové ionty se mohou spojit s negativně nabitými částmi proteinové molekuly, což snižuje tendenci proteinu k přilákání vrstvy molekul vody kolem něj, což opět umožňuje proteinové molekuly interagovat navzájem a srážet z roztoku.Kovové ionty jsou účinné i ve velmi zředěných roztocích